الأسئلة التقنية الشائعة حول الحقن في بحوث العمليات والتحقق (2)

أسئلة وأجوبة —————————————————————————————————————————————————

21. هل يمكنني أن أسأل عن طريقة اختبار مستوى التلوث ومقاومة الحرارة (قيمة D) للكائنات الحية الدقيقة قبل التعقيم؟
ج: عادةً ما يتم اعتراض مستوى التلوث الميكروبي عن طريق الترشيح الغشائي، ثم نقله إلى سطح وسط صلب، ويزرع ويُعدّ. يجب مراعاة حجم الترشيح وعدد الكائنات الحية الدقيقة المعترضة لضمان معدل كشف كافٍ (عائد ترشيح كافٍ) وقابلية للعد (الكثير من الكائنات الحية الدقيقة المعترضة ليتم عدها).

22. كيف يتم حساب كمية التلقيح وفقًا لقيمة D؟
ج: حساب كمية تلقيح الأبواغ Ni = 10Do (lgNo + 6) / Di
Ni هو عدد تلقيح الأبواغ الحرارية المتسامحة مع المؤشر البيولوجي ؛ No هو الحد الأقصى للكائنات الحية الدقيقة الملوثة قبل التعقيم ؛ Do هي الحد الأقصى المسموح به لقيمة D للكائنات الحية الدقيقة الملوثة ؛ Di هي قيمة D للأبواغ الحرارية المتسامحة مع المؤشر البيولوجي.

23. بالنسبة للمنتجات المعقمة نهائيًا بطريقة الاحتمالية المتبقية، إذا كان الحد الأقصى للكائنات الحية الدقيقة لكل دفعة قبل التعقيم، وكان وقت الاختبار المحدد 72 ساعة، بينما دورة الإنتاج المستمرة الفعلية أقصر بكثير من 72 ساعة، هل تعتبر نتيجة الاختبار مرجعًا فقط لمستوى ضمان التعقيم المعقم؟
ج: من الواضح أن نتيجة اختبار محتوى الكائنات الحية الدقيقة قبل التعقيم تتخلف كثيرًا عن عملية الإنتاج وليست مخصصة للتحكم الوسيط في الدفعة الحالية من المنتجات.
أهمية الفحص: أولاً، تقييم مستوى ضمان التعقيم لهذه الدفعة من المنتجات ؛ ثانيًا، بعد تجميع بيانات محتوى الميكروبات للعديد من الدُفعات قبل التعقيم لفترة طويلة، يمكن تقييم حالة تلوث الميكروبات لكل عملية من نظام الإنتاج قبل التعقيم كليًا، وذلك للإشارة إلى ما إذا كان نظام الإنتاج يمكنه التحكم بفعالية في تلوث الميكروبات بمستوى جيد وما إذا كان يحتاج إلى تحسين.

24. هل يمكنني أن أسأل عن طريقة دراسة أنواع وكمية الكائنات الحية الدقيقة؟ المعدات المطلوبة؟ إذا تم اعتماد طريقة الاحتمالية المتبقية، فهل من الضروري تحديد مستوى الكائنات الحية الدقيقة في عملية الإنتاج، وكم ستزداد التكلفة إذا تم إدخالها؟ بصفتي مُصنّعًا كبيرًا للحقن، هل يجب إنشاء مختبر ميكروبيولوجي خاص لاكتشاف مستوى التلوث الميكروبي قبل التعقيم بطريقة الاحتمالية المتبقية؟
ج: يمكن فحص درجة التلوث الميكروبي - أي الكمية - وفقًا لطريقة اختبار الحد الميكروبي في الأدوية ؛ يمكن تحديد أنواع الكائنات الحية الدقيقة بدورها من الجوانب التالية:
1) مراقبة مورفولوجيا المستعمرة بالعين المجردة ؛
2) مورفولوجيا المجهر وحركته ؛
3) اختبار كيميائي حيوي عام: صبغة جرام أو اختبار 3٪ KOH ؛
4) تحديد كيميائي حيوي (أي اختبار API) لتحديد الأنواع
عند استخدام طريقة الاحتمالية المتبقية، يجب الكشف عن مستوى تلوث الميكروبات في المنتج قبل التعقيم، بما في ذلك اختبار الغليان للبكتيريا الملوثة (مثل 100 درجة مئوية، 15 دقيقة) وعد الميكروبات.
يُعد المختبر الميكروبيولوجي ضروريًا لمصنعي الحقن، ويجب أن تشمل وظائفه الأساسية اختبار الحد الميكروبي للمواد الخام والمساعدة، واختبار التلوث الميكروبي قبل التعقيم، واختبار التعقيم للمنتج، واختبار الإندوكسين البكتيري، والفحص الديناميكي لبيئة الإنتاج (عدد جسيمات الهواء، والبكتيريا العائمة، والبكتيريا المستقرة). يمكن للمختبرات المؤهلة أيضًا القيام بالأعمال التالية: تحديد الكائنات الحية الدقيقة (يوصى بأن يقوم المختبر المركزي للمجموعة بتحديد API)، ومعايرة المؤشرات البيولوجية (أي تحديد قيمة D، يُقترح أن يقوم المختبر المركزي لمجموعة المؤسسات بهذا العمل).

25. هل من الضروري التحقق من عملية التعقيم لطريقة التعقيم الزائد؟ ما هو الفرق بين عملية البحث والتطوير للمنتج والتحقق في الإنتاج الفعلي لطريقة الاحتمالية المتبقية؟
ج: بالطبع، التحقق مطلوب. المادة 83 من ملحق CGMP التابع للاتحاد الأوروبي: يجب التحقق من جميع عمليات التعقيم. طريقة الاحتمالية المتبقية هي تصميم عملية التعقيم، والتي تحتاج في حد ذاتها إلى التحقق منها والتأكد منها.

26. هل طريقة القتل الزائد متأكدة من عدم الحاجة لاختبارات تحدي الميكروبات؟
ج: معنى طريقة القتل الزائد هو تقليل عدد الكائنات الحية الدقيقة في المنتج بمقدار 12 لوغاريتم، واختبار تحدي الميكروبات هو إثبات أن الاحتمالية المتبقية للكائنات الحية الدقيقة لا تزيد عن 10-6، لذلك لا يمكن لطريقة القتل الزائد إجراء اختبارات تحدي الميكروبات.

27. هل يخضع المنتج المعقم نهائيًا للتحقق منفصل من المعدات لكل صنف يتم تقديمه للتسجيل؟ هل من الممكن التحقق من المعدات مرة واحدة فقط ويمكن استخدام الأصناف الأخرى بشكل مشترك؟ هل يمكن عدم إرفاق بيانات التحقق من المعدات ببيانات التحقق من الصنف، ولكن فقط كمرجع أرشيفي؟
ج: لا يحتاج المنتج المعقم نهائيًا إلى التحقق بشكل منفصل لكل صنف يتم تقديمه للتسجيل. إذا تبنى الصنف المسجل نفس ظروف التعقيم أو ظروفًا أقل، فيمكن فقط إجراء التحقق من المعدات في ظل ظروف تعقيم درجة حرارة أعلى ؛ يجب أيضًا إرفاق بيانات التحقق من المعدات لظروف تعقيم الصنف ببيانات التحقق من الصنف.

28. هل يمكن لعملية تعقيم شكل الجرعة غير السائلة، أو الحقن شبه الصلب أو المسحوق حساب قيمة مشابهة لـ F0؟ هل يمكنك حساب SAL؟ ما هو الحكم المحدد؟
ج: لا يمكن، ولكن يمكن حساب SAL. راجع شجرة القرار لاختيار عملية التعقيم في الاتحاد الأوروبي.

29. فيما يتعلق باختبار تعبئة وسط الثقافة، سواء تم التحقق منه لخط الإنتاج أو للمنتجات المعلنة (يجب تعبئة كل منتج في ثلاث دفعات للتحقق)، هل يمكنني أن أسأل؟
(1) هل يمكن للتحقق من خط الإنتاج أن يحل محل اختبار تعبئة المنتج المعلن (أصناف مماثلة)؟
(2) ما هو نوع الوسط الذي تريده، ثيوغليكولات ومارتن المعدل؟
(3) هل هناك حاجة إلى ثلاث دفعات من اختبارات التعبئة لمواصفات التعبئة المختلفة في فحص GMP؟
ج: (1) يجب إجراء اختبار التعبئة المحاكاة لوسط الثقافة وفقًا للمنتجات المختلفة ومواصفات التعبئة وأشكال التعبئة. على سبيل المثال، إذا كان المنتج عبارة عن حقن مسحوق، فسيتم عادةً تعبئة وسط الثقافة السائل أولاً، ثم تعبئة مسحوق معقم محاكٍ للمنتج (مثل مسحوق PEG المعقم) ؛ إذا كان الحقن المعقم أو حقن المسحوق المجفف بالتجميد، فلا حاجة إلا إلى تعبئة وسط الثقافة السائل ؛ إذا كانت مواصفات التعبئة 2 مل، 5 مل، 10 مل، فعندئذٍ حتى لو كان نفس المنتج يحتاج إلى إجراء اختبار تعبئة محاكاة لوسطه الخاص. إذا كان التعبئة على شكل قوارير أو أشكال أخرى (مثل المحقنة المعبأة مسبقًا، والقارورة)، فيجب إجراء اختبارات تعبئة محاكاة لوسط الثقافة على التوالي نظرًا لاستخدام خطوط إنتاج مختلفة.
في العمل المحدد، بالنظر إلى أن اختبار تعبئة محاكاة الوسط هو في الواقع تحقق منهجي لخط الإنتاج بأكمله، بما في ذلك معدات الإنتاج، والبيئة، وتشغيل الأفراد، إلخ، إذا تم إجراء اختبار تعبئة محاكاة الوسط في أسوأ حالة، أي أن الزجاجة هي الأكبر، وسرعة التعبئة هي الأبطأ، والأفراد هم الأكثر، والوقت أطول من وقت الإنتاج العادي، إلخ، فيمكن إجراء اختبار تعبئة محاكاة الوسط لكل منتج، كل مواصفة دون الحاجة ؛ إذا لم تكن في أسوأ حالة، فيجب إجراؤها وفقًا للمنتج.
(2) يستخدم وسط الطيف الواسع بشكل عام لتعزيز نمو البكتيريا موجبة الجرام، والسلبية، والخميرة، والعفن، مثل وسط التربتون فول الصويا، ويستخدم الوسط اللاهوائي فقط في ظروف خاصة.
(3) فقط في وقت التحقق الأول، تتطلب كل مواصفة ثلاث اختبارات ناجحة متتالية لملء محاكاة الوسط، تليها مرتين لاحقتين في السنة، ومجموعة واحدة من اختبارات ملء محاكاة الوسط في كل مرة.

30. هل من الممكن ملاحظة التأثير المعقم للفلتر في عملية التعقيم والتركيب في اختبار ملء الوسط، بعد تعقيم الوسط، قبل الملء، ثم الترشيح من خلال غشاء الفلتر؟
ج: اختبار ملء الوسط هو تحقيق لدرجة ضمان التعقيم لجميع الخطوات، بما في ذلك الترشيح المعقم. يوصى بإعداد الوسط واستخدامه مباشرة في عمليات الترشيح المعقم والملء اللاحقة. في الممارسة العملية، يجب الانتباه إلى منع الجسيمات غير القابلة للذوبان من سد الفلتر.

31. كم عدد دفعات اختبارات ملء الوسط التي يتم إعادة التحقق منها مرتين في السنة كل عام؟
ج: لإعادة التحقق السنوية من منتج ما، فإن الممارسة المعتادة هي إجراء اختبارات ملء الوسط مرتين في السنة، كل دفعة.

32. تغير وقت الزراعة المعقمة لطبعة عام 2005 من الصيدان الصيني إلى 14 يومًا. هل من الضروري أيضًا تمديد اختبار الزراعة عند درجتي حرارة بعد محاكاة الوسط وملئه؟
ج: يجب ألا يقل إجمالي وقت الزراعة عن 14 يومًا. يمكن تقسيمه إلى درجتي حرارة (22.5 درجة و 32.5 درجة) لمدة 7 أيام على الأقل، أو درجة حرارة واحدة (22.5 درجة) للزراعة المباشرة.

33. يرجى شرح طريقة الإحصاء المستخدمة وكيفية حساب الجدول.
ج: الشرح المفصل لصيغة الحساب، يمكن الرجوع إلى إدارة السلامة الدوائية التابعة لإدارة الدولة للمنتجات الغذائية والأدوية ومركز إدارة شهادات الأدوية الذي نظمته "دليل التحقق من إنتاج الأدوية (2003)" (دار الصناعة الكيميائية) كتاب 258.
هناك طريقتان للحساب. واحدة هي استخدام الصيغة التقريبية لتوزيع بواسون، أي P (X> 0) = 1- e-Np> 0.95، حيث P هو حد الثقة، و N هو عدد الزجاجات أو الدُفعات المحاكاة، 0.1٪ (احتمال التلوث)
الطريقة الأخرى هي صيغة ذات الحدين الأكثر دقة، أي P (X> 0) = 1- (1- X)، حيث P هو حد الثقة، و N هو عدد الزجاجات أو الدُفعات، و 0.1٪ (احتمال التلوث)
في الصفحة 259 من الكتاب، يوجد جدول حول العلاقة بين كمية التعبئة المحاكاة، وكمية التلوث، واحتمال التلوث في تعبئة محاكاة بحد ثقة 95٪.

34. في الفيلم التاسع والخمسين في الصفحة 72 من الكتيب، يذكر أن الاختلافات في إجراءات ملء الوسط في أوجه التشابه والاختلاف في التحقق من عملية حقن المساحيق، وحقن المساحيق المجففة بالتجميد، وحقن الحجم الصغير هي بشكل رئيسي ما، وكيف، وأين، ومن أين تنتهي؟
ج: بالنسبة لحقن المساحيق المعقمة، فإن شكل ملء الوسط له خصوصية معينة، إذا كنت ترغب في تحضير مسحوق معقم محاكى، أضف وسطًا سائلًا إلى الزجاجة باستخدام حقنة بعد التعبئة؛ أو قسم مسحوق الوسط المعقم بشكل منفصل، أضف ماء الحقن المعقم باستخدام حقنة بعد الانتهاء. ومع ذلك، فإن الهدف هو التحقيق في درجة ضمان التعقيم لعملية التعبئة المعقمة بأكملها.

35. كيف يتم التحقق من إغلاق الحاويات؟
ج: غالبًا ما تُستخدم الطرق الفيزيائية والميكروبيولوجية للتحقق من إغلاق الحاوية. يتميز الكشف الفيزيائي بالعديد من المزايا، مثل حساسيته العالية، وسهولة استخدامه، وسرعة الكشف، وتكلفته المنخفضة. خلال فترة صلاحية المنتج، يمكن استخدام طرق الاختبار الفيزيائية لتحديد ما إذا كانت سلامة التعبئة تلبي المتطلبات المحددة. سبب مهم لاختبار سلامة التعبئة هو ضمان بقاء المنتجات المعقمة معقمة.
لذلك، في مرحلة البحث والتطوير لتعبئة المنتج، يجب أن نفكر في استخدام اختبار غزو الميكروبات أو طريقة الاختبار الفيزيائي التي تم إثباتها وهي أكثر فعالية من الكشف الميكروبي لاكتشاف سلامة تعبئة المنتج. ومع ذلك، بالنسبة لاختبار استقرار المنتج في الفترة الفعالة، من الصعب إجراء اختبار غزو الميكروبات، لذلك يُقترح اعتماد طريقة الكشف الفيزيائي. اختبار غزو الميكروبات هو اختبار صعب لسلامة الحاوية النهائية / نظام الإغلاق المعقم. في اختبار التحقق، خذ زجاجة الحقن أو زجاجة السيلين (الزجاجة)، املأها بالوسط، وعقم السدادة والغطاء على خط الإنتاج العادي. ثم، تم غمر سطح إغلاق الحاوية في محلول بكتيري متحرك عالي التركيز، وتم إخراج غزو الكائنات الحية الدقيقة، وزرعها، والتحقق منها لتأكيد سلامة نظام إغلاق الحاوية. في الوقت نفسه، كان هناك حاجة لاختبار التحكم الإيجابي لتأكيد قدرة وسط الزراعة على النمو.

36. في استخدام الغمر الميكروبي للتحقق من إغلاق الحاوية، لماذا يتم إزالة الغطاء المصنوع من الألومنيوم مسبقًا، بعد إزالة الغطاء المصنوع من الألومنيوم، هل يوجد فقط سدادة مطاطية، لذلك في أثناء الاختبار هل سيكون هناك تسرب للسائل ويؤثر على نتائج التحقق؟
ج: إزالة الغطاء المصنوع من الألومنيوم هو لخلق حالة أكثر صرامة. في المحاضرة، يتم أخذ حقن المساحيق المجففة بالتجميد كمثال. عادةً، يكون هناك فراغ عالي في الحاوية، مما لن يسبب تسربًا. يمكن للمختبر أن يحكم ما إذا كان إزالة الغطاء المصنوع من الألومنيوم ينطبق وفقًا لخصائص منتجه.

37. في التحقق من قابلية الإغلاق، مثل التحقق من البراميل المصنوعة من الألومنيوم، لا يمكن ملاحظة النتائج عن طريق التحقق من الوسط. هل هناك طريقة أخرى؟
ج: بالنسبة لحاويات المواد الخام المعقمة، يوصى بتجربة الطرق الفيزيائية، مثل ترشيح المحلول الملحي.

38. ما هي الكمية العامة للعينات لكل تحقق من التسرب وما هي فترة إعادة التحقق؟
ج: يمكن أخذ 10 زجاجات على الأقل من البداية والوسط والنهاية من خط الغدة لإجراء الاختبار، يجب أن يحقق التحقق الأولي خاصية الإغلاق في أوقات مختلفة خلال فترة الصلاحية، ثم التحقق من أنه يمكن إجراؤه مرة واحدة في السنة.

39. هناك متطلبات في إرشادات التحقق للتحقق من قابلية إغلاق منتجات الحقن الكبيرة، ولكن لا توجد متطلبات للمنتجات الفرعية والمنتجات المجففة بالتجميد. هل لا داعي للتحقق من قابلية الإغلاق؟
ج: يجب إجراء التحقق من إغلاق الحاوية في حقن الحجم الكبير، وحقن الحجم الصغير، وحقن المساحيق.

40. هل هناك حاجة لاختبارات ضيق الحاوية في جميع تركيبات الحقن، مثل الأمبولات وزجاجات المحلول الملحي؟
ج: يجب إجراء اختبار إغلاق الحاوية في جميع أشكال جرعات الحقن مثل الأمبولات وزجاجات المحلول الملحي. ومع ذلك، تختلف الطرق المستخدمة. تُستخدم طريقة الاختبار الفيزيائي بشكل عام في الأمبولات، وتُستخدم الطرق الفيزيائية والميكروبيولوجية في زجاجات السيلين.